考马斯亮蓝

考马斯亮蓝（coomAssiebrilliantblue）一定范围内与蛋白质浓度成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

中文名：考马斯亮蓝

外文名：coomAssiebrilliantblue

用于：蛋白质的定量测定

分类：G-250和R-250

1、化学性质

CoomAssiebrilliantblueR-250

分子结构如右图

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。

2、染色

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

3、测定含量

简介

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果，如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。

浓染液

将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL95%乙醇，加入100mL浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200mL，此染液放4℃至少6个月保持稳定。

样本准备

尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之间绘制标准曲线。

溶解

将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。

稀释

按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

作用

每个样本加5mL

稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．

计算

根据标准曲线计算待测样本的浓度。

4、处理方法

考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。