工业用微生物菌种的来源及选育

(一)微生物菌种的来源

一般通过下列好多个方式搜集菌种、收集试品和分离筛选：

(1)是依据材料立即向有科研机构、高等学校、加工厂或菌种储藏单位索要或选购;

(2)从自然界中收集试品分离;

(3)从一些发醇产品中分离筛选目地菌种。

当今发醇工业生产常用菌种必然趋势是以野山菌转为基因变异菌，当然采用转为新陈代谢繁育，从引起基因变异转为基因重组的定项繁育。

(二)微生物工业生产菌种的分离

1、天然的菌种的分离、筛选全过程

(1)新菌种分离与筛选的流程

菌种分离的步骤以下：

标本采集 →标本采集原材料的预备处理→聚集塑造→菌种初筛→ 菌种复筛→特性评定→ 菌种储藏

①取样

取样时节：以溫度适度，降雨量很少的初秋为好。

采土方法：在选定适度地址后，用小铲子去除底土，取离路面5-15厘米处的土约20g，盛入清理的牛皮纸包装袋或包装袋中，扎好，标识，纪录取样時间、地址、自然环境标准等，以便查考。以便使土样中微生物的总数和种类尽少转变，宜将试品逐渐分次寄到，便于立即分离。

②标本采集预备处理

④纯种分离：选用画线分离法、稀释液分离法等提纯方式 获得单菌落。

⑤增产菌种的筛选：这一步是选用与生产制造相仿的培养基和塑造标准，根据三角瓶的容积开展中小型发醇实验，得到 合适于工业化生产用菌种。也要对菌种开展发醇特性测量，

⑥毒副作用实验：据有的国家规定，微生物中除酿酒酵母、脆壁酵母菌、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌做为服用不必作毒副作用实验外，别的微生物做为服用，均需根据2年之上的毒副作用实验。

2、菌种的分离方式

(1)释放可选择性工作压力分离法

主要是运用不一样类型的微生物其生长发育繁育对自然环境和营养成分的规定不一样，如溫度、pH、血浆渗透压、co2、氮源、氮源等，人为因素操纵这种标准，使之有利于某种或某类微生物生长发育，而不利别的类型微生物的存活，以做到使目地菌种占上风.而足以迅速分离提纯的目地。如能够 操纵塑造时的氧，可将好氧微生物和厌氧发酵微生物分离;根据操纵溫度，可将嗜热微生物和非嗜热微生物分离;操纵pH，可将嗜酸、嗜碱微生物分离等。在分离培养基中也能够 添加不一样的抗菌素或实验试剂来提升可选择性。如在分离放线菌和病菌时，可添加抗真菌药抗菌素;分离细菌时，可添加抗病菌药品。

(2)任意分离方式

一些微生物的物质对筛选沒有立即的可选择性标示功效，因而常选用任意分离方式 分离。

A、抗菌素造成菌的分离

抗菌素造成菌的分离常见抑菌圈法。试验务必用专用工具菌：选用抗菌素的敏感菌，传统式上常见橙黄色链球菌和枯草杆菌。

B、抗癌药物造成菌的分离

抗癌药物造成菌的分离常见方式 ：生物化学诱导法、SOS生色测定法、DNA修复工作能力突然变化株。基本原理是运用DNA的损害，微生物产生突然变化。

B1、生物化学诱导法：将大肠埃希菌的lacZ遗传基因联接在λ噬菌体的PL启动子下，当DNA损伤时，引起λ阻遏物CI溶解，PL启动子起动lacZ基因转录，测量表述的ß-半乳糖苷酶促反应，来检验药品的存有。

B2、SOS生色测定法：运用当DNA损伤时，可活性yecA蛋白质，从而溶解噬菌体的阻遏蛋白质，再造成sifA遗传基因起动lacZ基因转录，测量表述的ß-半乳糖苷酶促反应，来检验药品的存有。

C、细胞生长因子造成菌的分离

以碳水化合物造成菌为例子，详细介绍筛选方式 。最先将待试菌连接加了抗真菌药的化学物质(如亚胺环己酮)的分离培养基中生长发育，随后选用影印法，将菌落打印到能适用碳水化合物造成菌生长发育的培养基中，塑造2-三天后，用紫外光杀厅长好的菌落，再往此平板电脑上边铺一层相对营养成分缺点型菌种菌悬液，塑造16小时后，被杀掉的碳水化合物造成菌的菌落周边需有一检验菌的生长发育圈。

(3)目地微生物分离

A、依据形状筛选突然变化株

B、依据平板电脑菌落生化反应筛选变株

全透明圈法、呈色圈法、抑菌圈法、混浊圈法等。

①全透明圈法：在平板电脑培养基中添加溶解度较弱的底物，使培养基浑浊。能溶解底物的微生物便会在菌落周边造成全透明圈，圈的尺寸基本反应当菌种运用底物的工作能力。该法在分离水解酶造成菌时选用较多，如脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、核酸酶造成菌都是在带有底物的可选择性培养基平板电脑上产生人眼由此可见的全透明圈。

在分离某类造成柠檬酸的菌种时，也一般 选用全透明圈法开展初筛。在可选择性培养基中添加碳酸氢钙，使平板电脑成混状，将试品混液擦抹到平板电脑上开展塑造，因为造成菌可以把菌落周边的碳酸氢钙水解反应，产生清楚的全透明圈，能够 随便地辨别出去。分离乳酸菌造成菌时，因为乳酸菌是一种极强的柠檬酸，因而，在培养基中添加的碳酸氢钙不但有辨别功效，也有酸水解作用。

②掉色圈法：针对一些不容易造成全透明圈物质的造成菌，可在底物平板电脑中添加显色剂或显色剂，使所需微生物能被迅速辨别出去。如筛选果胶酶造成菌时，用含0.2%阿拉伯胶为惟一氮源的培养基平板电脑，对含微生物试品开展分离，待菌落成长为后，添加0.2%刚果红水溶液染色4h，具备溶解阿拉伯胶工作能力的菌落周边便会出現绛红色水解反应圈。在分离磷酸造成菌时，可在培养基中添加溴百里酚蓝，它是一种酸碱指示剂，掉色范畴在pH6.2～7.6，当pH在6.2下列时为淡黄色，pH7.6之上为深蓝色。若平板电脑上出現产酸菌，其菌落周边会变为淡黄色，能够 从这种产酸菌中筛选磷酸造成菌。

③生长发育圈法：生长发育圈法一般 用以分离筛选碳水化合物、多肽链和维他命的造成菌。专用工具菌是一些相对性应的营养成分缺点型菌种。将待检菌施胶于含浓度较高的的专用工具菌并缺乏所需营养物质的平板电脑上开展塑造，若某菌种能生成平板电脑需要的营养物质，在该菌种的菌落周边便会产生一个浑浊的生长发育圈。如漂呤营养成分缺点型大肠埃希菌(如E.coliP264)与没有漂呤的琼脂混和倒平板，在其上施胶含菌试品隔热保温塑造，周边出現生长发育圈的菌落即是漂呤造成菌。

④抑菌圈法：常见于抗菌素造成菌的分离筛选，专用工具菌选用抗菌素的敏感菌。若被检菌能代谢一些抑止菌生长发育的化学物质，如抗菌素等，便会在该菌落周边产生专用工具菌不可以生长发育的抑菌圈，非常容易被辨别出去。