显微摄影术

显微摄影术，是一种利用显微照相装置，把显微镜视野中所观察到物件的细微结构真实地记录下来，以供进一步分析研究之用的一种技术。它在科学研究中，尤其是医学、生物学研究领域中已成为一项常规又不可缺少的研究技术之一。

1、基本原理

显微摄影是使目镜中的影像投射出来，射在照相底片上，使底片感光而记录下视野中现象的方法。在显微摄影时，影像的投射情况如图1所示，光线自片子中微小物件W射入物镜O后，在I1处造成一个放大而倒立的实像，I1在目镜焦平面Fe稍下处，二者距离为d。此实像被目镜再进一步放大后，射出目镜在I2处的屏幕上形成一个放大的实像。假如屏幕为一毛玻璃，即可取景对焦，准焦后换上底片即可进行拍摄。

2、摄影装置

最简单的显微摄影装置包括光学显微镜、照相机或电影摄影机及取景器（图2）。作用在照相底板上的有效光学影像一般是由显微镜的全部光学系统（物镜+目镜）形成。而照相机则与一般照相机不同，它们是专为显微照相设计的，没有照相机透镜，可直接装在显微镜镜筒上。此外，借助于照相接筒可以把照相机与镜筒连接起来用于显微照相。一般在接筒上有一个带长方形取景框和聚焦目镜合称取景器。用来取景、调焦、调整像的宽度。选用合适的曝光时间，有的还可以连接自动曝光装置，以便更准确地确定曝光时间。

3、摄影须知

显微摄影是随着现现代生代物技术的发展而产生的新的名词，从本质上来讲，显微摄影是在原来显微技术的基础上增加了拍摄功能，即利用专业的显微摄影设备将显微镜下看到的视野范围通过照片的形式表现出来的一门技术。是科学研究，经验交流中不可缺少的手段之一。

如何拍摄一张好的显微摄影图片，最主要的还是取决于显微镜以及摄影设备的成像质量，在这些硬件设备一定的条件下，要拍摄一张满意的显微摄影图像，应该注意以下几点：

●制作清晰的标本片，其中组织切片应厚薄适度，染色片不应有多余的染料等。

●选择性能优良干净的载玻片和盖玻片。

●使用高性能的物镜（最好用复消色差的平场物镜）和聚光器。

●拍摄时应准确地调焦

●正确的做好白平衡

●选择合理的曝光时间

●适当控制背景噪声

●合理选择设备参数

前期准备

●相机和显微镜连接

●将随机附带的光盘插入光驱，完成相机驱动和软件的安装

●检查显微镜的光否干净无学系统是污染，样品是否干净

●目镜下调焦，观察样品。

显微拍摄操作

●启动相机：相关相机软件，启动相机

●调焦：使用高速预览模式调焦。图森相机具有高速预览功能，方法是在调焦的时候将相机的分辨率调至较小值，以增大预览速度。而拍照的时候，则应选择在高分辨率模式下。

●白平衡：左右移动载玻片，至样品完全移出聚光镜范围以外，点击自动白平衡

●调节相机参数：相机参数的调节可以极大的影响图片的质量，这些参数主要包括曝光时间调节，增益调节，以及gamma值，饱和度，亮度的调节，为了拍摄更为真实的显微摄影图片，应采用适当的曝光时间同时尽量减小增益，以降低背景噪声，同时应保证gamma值，饱和度和亮度的值为0。

●进行拍摄：点击拍摄按钮，系统将弹出保存界面，将文件命名之后即可保存，也可设置自动保存。

●录像：点击录像按钮，即可进行录像

●剪切拍摄功能：可以选择对视野范围的局部进行拍照