多国科学家称韩春雨成果无法重复，要求公开数据
韩春雨
河北科技大学的副教授韩春雨用他的新基因编辑技术NgAgo-gDNA震惊了全球学术界，但这一技术正面临越来越多的质疑。自从他的论文于5月2日发表在《自然生物技术》在线版上以来，到目前为止，世界上还没有实验室宣布它可以完全成功地重复韩春雨的实验。现在，来自许多国家的科学家已经要求自然生物技术公司介入调查，并披露韩春雨实验的所有原始数据和实验条件。
北京时间7月29日，曾支持韩春雨的澳大利亚国立大学遗传学家盖尔坦·布尔吉奥转而反对敌人。他在推特上发表了一篇题为《我的NgAgo体验》的长文章，否认了他在7月15日之前部分重复实验时得出的结论，称没有严格证据表明韩春雨的NgAgo-gDNA技术显示出基因编辑的迹象，并要求韩春雨披露所有原始数据和实验条件。
7月31日下午，澎湃新闻(www.thepaper.cn)联系韩春雨寻求回应。韩春雨说，“看来我不需要回应。我看了一下，许多发信息的人都是专家。”
韩春雨的NgAgo-gDNA技术挑战了最流行的基因编辑技术CRISPR-CASC 9。这篇论文一发表，就引起了轰动。基因编辑技术是指使人类能够“编辑”目标基因，实现特定DNA片段的缺失和添加。CRISPR-CAS9是目前最常见的基因编辑技术，被称为“基因魔法剪刀”。5月2日，韩春雨研究小组的论文《利用自然生物技术》在网上发表了“利用自然杆菌进行DNA引导的基因组编辑”。为了绕过流行的CRISPR-CAS9技术，该研究小组使用格雷格诺杆菌的Argonaute核酸内切酶进行由DNA介导的基因组编辑，称为NgAgo-gDNA。
质疑韩春雨的盖尔坦·伯吉奥在7月29日发表的一篇长论文中介绍了重复实验的详细过程、操作和结论，并附上7张实验结果的图表。
聚合酶链反应的结果是基于原核生物将NgAgo注入受精卵后的胚泡。
核酸内切酶T7检测注射牛血清白蛋白受精卵的聚合酶链反应产物。
基于小鼠受精卵原核注射后胚泡的聚合酶链反应和电泳凝胶。
小鼠胚泡通过原核共注射NgAgo和5’磷酸化ssDNA获得。经过DNA提取、PCR扩增和测序，获得了典型的测序结果。
微注射NgAgo小鼠受精卵的凝胶电泳。
所有电泳凝胶代表性序列的聚类比对。Ank-1用作参考序列。
代表性测序色谱图(使用反向引物测序)。
他说:在对三种不同的细胞进行了多次尝试和测试后，没有发现任何证据能严格证明NgAgo的基因编辑。在他看来，NgAgo酶需要加热到50摄氏度才有效，质疑NgAgo内切酶在37摄氏度的活性。
在这篇长文章中，盖尔坦·博吉奥说，《自然生物技术杂志》应该要求韩春雨披露所有原始数据和实验条件，“恩戈的未来还不明朗。”
盖尔坦·伯吉奥选择小鼠受精卵进行重复实验。因为他已经研究老鼠细胞很长时间了，并且对它们很熟悉，两年半前，他完成了他对老鼠细胞的CRISPR-Cas9基因的第一次编辑。由于韩春雨的论文使用人类细胞，从技术上讲，盖尔坦·伯吉奥和韩春雨没有做同样的实验。然而，由于小鼠的结构与人体相似，人们普遍认为人类细胞可以完成的实验也可以在小鼠细胞上进行。
在盖尔坦·布尔吉奥发表这篇文章后不久，西班牙高等科学委员会(CSIC)下属的国家生物技术中心的科学家卢里斯·蒙托里奥转发了这篇文章，并在推特上写道:“克里斯普万岁！！！CRISPR-Cas9系统将持续数百亿年。很难打败。”
根据公共信息，Lluis Montoliu在2015年辞去了非营利组织“国际转基因技术协会”的主席职务。根据他在推特上的简介，勒维斯·蒙托里乌的研究方向是哺乳动物基因组和基于转基因动物的罕见人类疾病研究。
鲁伊斯·蒙托里奥在推特上透露，在恩戈之前，他们已经尝试了大约2年从阿戈家族的嗜热栖热菌中检测这种酶，但是他们也失败了。
然后，在7月30日，Lluis Montoliu更新了他的博客帖子，称他已经停止了NgAgo上的所有项目，并“建议所有想这样做的人不要再浪费任何资源”。
7月30日晚，方在推特上发布了四个电子邮件截图，并附上文字说明:“国际转基因技术协会前会长蒙托里奥今天致信协会成员，建议停止河北科技大学的实验，不要再浪费时间、金钱和人力。根据这项技术的调查，140个回复中只有一个(邱子龙，中国神经研究所？)答案有效，73个无效，63个正在验证中。”
图片显示发件人是“国际转基因技术协会”，代表Lluis Montoliu，邮件标题是“对Ago的巨大失望:CRISPR万岁！”当地时间7月29日上午9: 49。邮件用粗体写道:“(目前最重要的信息是)NgAgo在哺乳动物细胞的基因编辑中不起作用”，并且“我建议每个人都放弃涉及NgAgo的项目”。
方发来的邮件截图。
然而，卢伊斯·蒙托里乌和Lluis蒙托里乌所在的“国际转基因技术协会”的言论引起了包括中国科学院上海神经科学研究所研究员邱子龙在内的一些国内科学家的不满。7月30日晚，他在自己的微博上质疑“国际转基因技术协会”和Lluis Montoliu在该领域的专业性，并以真实姓名进行验证。
邱子龙质疑“国际转基因技术协会”和鲁伊斯·蒙托里在这一领域的专业性。
此前，据报道邱子龙已经成功地重复了这个实验。7月20日，科学网的一篇博文称，邱子龙成功地重复了韩春雨的实验。然而，邱子龙本人在7月21日做出回应，称实验室仍在重复和优化各种条件。目前的实验结果“与韩春雨论文中的结果相去甚远”，并呼吁韩春雨提供“可以重复NBT发表的文章的NgAgo，或优化的Ngago2.0，智能版本等”
自6月底以来，人们听到了对NgAgo的质疑。韩春雨自己也在百度贴吧上做了一些回应。
6月28日，他在回复网民时表示，新系统推出后“不容易使用”。他也同意NgAgo系统目前并不稳定，当2.0版本发布时，他会找专门的机构免费发布它。
面对疑问，他说，“我敢在协和讲座中向addgen提交质粒并分发质粒。我仍然对我的实验的可重复性非常勇敢。”韩春雨的“addgen”实际上是ADDGEN，一个在全世界科学家之间分享质粒的非营利组织。澎湃新闻(www.thepaper.cn)确实在Addgene官方网站上看到了韩春雨上传的质粒信息。这些质粒可以被世界各地的科学家直接用来重复韩春雨的实验。
7月2日，在与方一起发布的质疑原文的帖子中给予了更为详细的回应，强调NgAgo系统对污染特别敏感，在实验过程中不应有寄生菌和支原体的污染，并对实验提出了技术建议。
然而，7月2日之后，韩春雨没有进一步的答复。7月4日，澎湃新闻(www.thepaper.cn)联系了韩春雨，他以“学校告诉我不要做任何回应”拒绝了
一些遗传学家告诉澎湃新闻(www.thepaper.cn)，如果自然生物技术公司在调查后最终同意韩春雨的实验无效，他5月2日发表的论文将被自然生物技术公司删除。
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