噬菌体抗体

噬菌体抗体库技术是近年发展起来的一项新的基因工程抗体技术。它是将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体，转染工程细菌进行表达，然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。

中文名：噬菌体抗体库

外文名：phagedisplayantibodylibrary

1、简介

噬菌体抗体库技术是近年发展起来的一项新的基因工程抗体技术。它是将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体，转染工程细菌进行表达，然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体，在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性。

（一）基本原理和程序噬菌体抗体库技术的原理，简言之就是用PCR技术从人免疫细胞中扩增出整套的抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因，克隆到噬菌体载体上并以融合蛋白的形式表达在其外壳表面。这样一来噬菌体DNA中有抗体基因的存在，同时在其表面又有抗体分子的表达，就可以方便地利用抗原—抗体特异性结合而筛选出所需要的抗体，并进行克隆扩增。使抗体基因以分泌的方式表达，则可获得可溶性的抗体片段。在建库过程中如果将VH和VI。随机组合，则可建成组合抗体文库；如果抗体mRNA来源于未经免疫的正常人，则可以在不需要细胞融合的情况下建立起人天然抗体库。

构建噬菌体抗体库通常包括以下几个过程：①从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴细胞，提取mRNA并反转录为cDNA；②应用抗体轻链和重链引物，根据建库的需要通过PCR技术扩增不同的Ig基因片段；③构建噬菌体载体。噬菌体抗体库载体有入噬菌体、丝状噬菌体和噬菌粒三种，其中后二者是目前构建表面表达的噬菌体抗体库（surfacedisplayantibodylibrary）常用载体；④表达载体转化细菌，构建全套抗体库。通过多轮的抗原亲和吸附—洗脱—扩增，最终筛选出抗原特异的抗体克隆。（二）噬菌体抗体库技术的特点1.模拟天然全套抗体库抗体文库可以达到或超过1011库容，所以能包含B细胞全部克隆。建库的外源基因来自人体外周血，骨髓或脾脏的淋巴细胞提取的mmDNA，mmDNA反转录形成cDNA，这些mRNA是人体多克隆细胞的总mRNA。使用的通用引物采自多个人体，具有人的种属普遍性。抗体的VH和VL基因的随机重组也增加了抗体的多样性。2.避免使用人工免疫和杂交瘤技术由于抗体库的大容量和极高的筛选效率，使得可以调出任意抗体基因，用基因工程方法制备抗体，从而避免了使用人工免疫动物和细胞融合技术。3.可获得高亲和力的人源化抗体在噬菌体抗体库技术中，VH和VL基因的随机重组模拟了体内抗体亲和力成熟的过程，所用的抗体基因又来自人体，因此，所产生的抗体必然都是高亲和力的人源化抗体。