鸟枪法

鸟枪法是将目的DNA随机地处理成大小不同的片段，再将这些片段的序列连接起来的测序方法，属于第一代测序技术。

1、英文

Shotgunmethod

2、用途

“鸟枪法”最初主要用于测定微生物基因组序列。近年来，生物鬼才文特尔（CraigVenter）及其公司美国塞莱拉公司先后利用改进的全基因组“鸟枪法”完成了果蝇和人类基因组的测序工作，证明了它在测定大基因组上的可行性和有效性。

3、大致步骤

1.使用限制性核酸内切酶（简称限制酶）将带有目的基因的DNA链切成若干小段。

2.再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中,并使其表达。

3.如果在某个细胞中得到了目的产物,就说明整合到该细胞中的DN******段就是所需要的DN******段。

4、特点

“鸟枪法”优点是速度快，简单易行，成本较低。但用它来测序，最终排序结果的拼接组装不太容易。中国科学家设计出了一种序列组装软件，能有效克服“鸟枪法”全基因组测序组装过程中的困难。

在研究中，他们首先在整个水稻基因组上生成许多已知长度的DNA（脱氧核糖核酸）切片，然后使它们按DNA序列的重合区域进行排列。这些切片数量足以覆盖水稻基因组4次。科学家们接着确定每个切片的碱基对序列，并用计算机程序将其组装成更长的片段，然后将这些片段排序、装配成10万多个被称为支架的更大组件。

他们设计出的软件重点是通过支架水平上的接近来进行组装，并采取了独特的重复序列处理算法，可识别并暂时屏蔽占水稻基因组约40%的重复序列。这样做的好处是既能减少计算量，又最大限度降低了错误拼接的可能性。

美国珀杜大学植物遗传学家贝内特泽恩评价说，中国科学家的水稻基因组计划，“提供了一个有关鸟枪测序法速度和效率的极好范例”。

5、限制

真核生物在基因表达时，结构基因中的内含子不能指导蛋白质的合成。所以真核生物的目的基因不能用“鸟枪法”获得。

“鸟枪法”是一种由生物基因组提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超声波等)或酶化学方法(如限制性内切核酸酶)将生物细胞染色体DNA切割成为基因水平的许多片段，继而将这些片段与适当的载体结合，将重组DNA转入受体菌扩增，获得无性繁殖的基因文库，再结合筛选方法，从众多的转化子菌株中选出含有某一基因的菌株，从中将重组的DNA分离、回收。

这种方法也就是应用基因工程技术分离目的基因，其特点是绕过直接分离基因的难关，在基因组DNA文库中筛选出目的基因。可以说这是利用“溜散弹射击”原理去“命中”某个基因。由于目的基因在整个基因组中太少太小，在相当程度上还得靠“碰运气”，所以人们称这个方法为“鸟枪法”或“散弹枪”实验法。

6、相关

真核生物基因大都由有编码功能的序列——外显子和无编码功能的序列——内含子，两者比例为1：4构成。鸟枪克隆法在基因组DNA文库中筛选到的目的基因，与染色体中的天然基因是一样的，含有内含子，在结构基因两端的连接区还有转录调控序列片段，即调节基因。这样的基因可供基因表达的调控分析。因为有内含子的存在，这样获得的结构基因不宜在原核宿主组织中表达。所以，要获得真核生物的目的基因，准确的说要获得真核生物目的基因的编码序列，不宜用鸟枪法。